教您如何正確對(duì)液相色譜柱使用緩沖鹽?
更新時(shí)間:2021-06-23 點(diǎn)擊次數(shù):2354次
液相色譜柱在使用前,先進(jìn)行柱的性能測(cè)試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。在做柱性能測(cè)試時(shí)要按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行,只有這樣,測(cè)得的結(jié)果才有可比性。
本產(chǎn)品可適用范圍廣,從極性化合物到非極性化合物都可獲得良好的分離,在碳水化合物如低聚糖、苷類糖化學(xué),生藥學(xué)和天然產(chǎn)物化學(xué),生物物質(zhì)如多肽、蛋白、核酸等多個(gè)領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。
液相色譜柱正確使用緩沖鹽:
緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機(jī)溶劑,因此緩沖鹽使用不當(dāng)會(huì)使其析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結(jié),柱壓上升;同時(shí)阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,使色譜柱的保留能力下降,柱效降低。緩沖鹽析出后,去除非常困難,因此,正確的使用緩沖鹽對(duì)延長色譜柱使用壽命非常重要。
正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出,因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話:使用前要過濾,使用后要沖洗。具體方法如下:
1、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動(dòng)相以1、0ml/min流速?zèng)_洗60min;使用后去除緩沖鹽的另一個(gè)方法是用過渡流動(dòng)相以0、2ml/min流速?zèng)_洗色譜柱過夜。
2、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動(dòng)相跑梯度之前,用與初始流動(dòng)相組成相同的過渡流動(dòng)相以1、0ml/min流速?zèng)_洗60min,再用該過渡流動(dòng)相以1、0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動(dòng)相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩,以避免梯度過程中緩沖鹽析出。
3、緩沖鹽析出的補(bǔ)救方法:
a、用甲醇/20/80以1、0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min
b、用甲醇/水=20/80以0、2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。